Поиск

Методы определения состава гумуса (часть 2)
21.10.2012

Оптическая плотность гуминовых кислот определяется в растворах гуматов натрия с помощью спектрофотометра с набором светофильтров. Для гуминовых кислот различных типов почв можно ограничиться определениями оптической плотности при двух длинах волн: 465 мμ (E4) и 665 мμ (E6). Величина соотношения Е4/Е6 независимо от концентрации углерода в растворе является постоянной для гуминовых кислот того или иного типа почвы. По мере повышения степени конденсированности ароматического ядра в гуминовых кислотах отношение E4/E6 становится уже и расширяется в тех случаях, когда ядро гуминовых кислот менее конденсировано.
Определение порога коагуляции (осаждения) гуминовых кислот. Определение порога коагуляции проводили с теми же препаратами гуминовых кислот, которые служили и для характеристики оптических свойств, по методике М.М. Кононовой.
Для коагуляции (осаждения) гуминовых кислот в качестве электролита брали CaCl2. В серию пробирок вносили возрастающие количества раствора CaCl2 (от 0,05 до 1 мл) и затем доводили объем дистиллированной водой до 1 мл. Далее в каждую пробирку приливали по 5 мл раствора гумата натрия, содержащего 0,136 г/л углерода.
Отмечали время в часах и соответствующее ему количество электролита (в мг*экв) для следующих моментов: начало коагуляции, о котором судили по появлению мути в прозрачном вначале растворе гумата; полная коагуляция, когда раствор над осадком оставался прозрачным и бесцветным.
Прием фракционирования гумусовых веществ при помощи электрофореза на бумаге. Мы применили метод электрофореза для фракционирования гумусовых веществ, описанный М.М. Кононовой.
Электрофорез проводили в приборе ЭФА-1, состоящем из электрофоретической горизонтальной камеры, источника питания и регистратора (денситометра). Воздушно-сухие навески (0,01—0,02 г) препаратов растворяли в 0,02 N NaOH, добавляя последний в таком количестве, чтобы конечное значение pH растворов равнялось 8—8,5. Для фореграмм пользовались медленно фильтрующей хроматографической бумагой (2,5х40 см). На заранее намеченную в середине полосы бумаги линию (стартовая линия) наносили при помощи калибрированной микропипетки испытуемый раствор гумата и высушивали под феном. После высушивания полосы быстро смачивали буферным раствором и помещали в камеру, опуская концы в сосуды с тем же раствором. В камеру одновременно помещали 9 полос; соответственно напряжение на 1 см ширины полосы составляло около 20 в.
По окончании фракционирования фореграммы вынимали из камеры, быстро высушивали под феном и просматривали в ультрафиолетовом свете. При этом в случае гуминовых кислот на фореграммах проявлялись три зоны: А — остающаяся на старте, Б — отрицательно заряженная (движущаяся к аноду) и В — наиболее подвижная, флуоресцирующая. Характер распределения на фореграммах фракций гуминовых кислот записывался на денситометре.