Однако раствором пирофосфата натрия с нейтральной реакцией невозможно выделить основное количество гумусовых веществ, особенно из низинных торфов, нередко имеющих рH около 5,5—5,8. Для максимально полной экстракции гумусовых веществ из торфяных почв необходимо проводить 3—4 последовательные экстракции. Увеличение количества экстракций свыше 3—4 нецелесообразно.
Ограничиться одной экстракцией тоже нельзя, так как из перегнойных почв однократная обработка не извлекает всех гумусовых веществ.
Исследования, проведенные нами на широком ряде торфяных почв, показали, что и многократной обработкой торфа только раствором пирофосфата натрия (так же как и многократной обработкой его только раствором 0,02 н. щелочи) невозможно добиться полного выделения гумусовых веществ из торфов. М. Чоудри и Е. Стивенсон установили, что наибольший выход гумусовых веществ происходит в том случае, когда щелочной обработке минеральной почвы предшествует обработка ее раствором пирофосфата натрия. Мы полагаем, что раствор пирофосфата сильно пептизирует комплексные алюмо- и железогумусовые соединения и гуматы кальция торфяных почв, после чего выход гумусовых веществ при экстракции щелочью вновь увеличивается. Для полной экстракции гумусовых веществ необходимо применение пирофосфатной обработки торфа с последующим применением щелочной обработки.
Предварительная обработка почвы раствором пирофосфата натрия создает условия для повышения выхода гумусовых веществ при последующей щелочной экстракции. Последовательные пирофосфатная и щелочная обработки торфа дают больший выход гумусовых веществ, чем многократная щелочная обработка. Необходимо применение 2-кратной обработки торфа раствором 0,02 н. щелочи при 80 °С по 1 ч после 3-4-кратного нагревания его с 0,1 М раствором пирофосфата натрия при 80 °С.
В заключение приводим краткое описание методики выделения гумусовых веществ из торфа. 3 г воздушно-сухого торфа заливают 300 мл горячего раствора 0,1 М пирофосфата натрия. Колбу с раствором нагревают на водяной бане при температуре 80 °С в течение 2 ч. Горячий раствор фильтруют. Торф с фильтра смывают горячим раствором пирофосфата обратно в колбу. Колбу доливают до 300 мл горячим раствором пирофосфата натрия. Операцию с нагреванием при 80 °С в течение 2 ч вновь повторяют и фильтруют раствор.
Для полного выделения гумусовых веществ необходимо проводить 3—4 экстракции. Для общей характеристики гумусовых веществ в торфах можно ограничиться двумя экстракциями.
Экстрагируемые растворы сливают вместе и очищают на бактериологических фильтрах 5 — 7 или на центрифуге ЦЛС при 8000 с-1 в течение 30 мин. В очищенном растворе определяют общий углерод по Тюрину, азот — по Кьельдалю, углерод и азот осаждаемой части гумусовых веществ — при рН 1.
Остаток торфа после экстракции пирофосфатом натрия заливают 0,02 н. раствором NаОН при соотношении торфа к раствору 1 : 100 и нагревают при 80 °С в течение 1 ч на водяной бане. Фильтруют горячий раствор и проводят повторную обработку торфа 0,02 н. NaOH. Горячий раствор фильтруют. Очистку раствора проводят указанным выше способом. Определяют углерод и азот общий и осаждаемой при рН 1 части гумусовых веществ.
При специальных исследованиях проводят определение оптической плотности осаждаемой части гумусовых веществ в пирофосфатной и щелочной вытяжках и ряда других констант.